Paulina Krzemińska 16.11.2011r.
Opis doświadczenia 5:
Badanie i oznaczanie aktywności amylazy ślinowej.
Do poniższych doświadczeń przygotowałam roztwór 2ml mojej śliny rozcieńczony do 10ml.
1. Stopniowy rozkład skrobi przez amylazę ślinową:
Zasada: Odczynnikiem wskazującym zawartość skrobi w roztworze jest roztwór jodu w jodku potasu. Na podstawie zabarwienia tegoż odczynnika możemy wywnioskować w których probówkach skrobia została do końca strawiona, a w których jeszcze nie. Pomiary przeprowadzałam co 30 sekund.
Obserwacje: 1 – granatowa, 2 – fioletowa, 3 – pomarańczowa, 4 – żółtopomarańczowa, 5 – jasnożółta, 6 – jasnożółta.
Wnioski: Trawienie skrobi w moich probówkach odbywa się relatywnie szybko; skrobia nie została zupełnie wykryta już w piątej probówce. Amylaza ma dużą aktywność.
2. Określanie optymalnego pH dla aktywności amylazy:
Zasada: Dla sześciu wartości pH sprawdziłam, przy której wartości trawienie skrobi zachodzi najszybciej.
Obserwacje: Granatowe zabarwienie skrobi (pochodzące od jodu) zniknęło najszybciej w pH = 6,5. Wyższe i niższe wartości pH powodowały wolniejszy zanik granatowej barwy, natomiast dla pH = 5 skrobia miała cały czas granatowy kolor.
Wnioski: Optymalnym pH dla amylazy jest wartość 6,5.
3. Określenie optymalnej temperatury dla aktywności amylazy:
Zasada: Pomiary przeprowadziłam dla 3 różnych temperatur (temp. pokojowa: 20oC, 37oC oraz 45oC) i sprawdzałam dla której wartości reakcja zachodzi najszybciej.
Obserwacje: Granatowe zabarwienie najszybciej znika dla temperatury 37oC.
Wnioski: Amylaza ślinowa jest najaktywniejsza w temperaturze 37oC.
4. Oznaczenie aktywności amylazy ślinowej metodą Wohlgemuta:
Pomiar przeprowadziłam w pH i temperaturze wyznaczonych w poprzednich punktach, które odpowiadają największej aktywności amylazy. Polegał on na przygotowaniu coraz bardziej rozcieńczonego roztworu śliny poprzez dodawanie dwóch ml roztworu z jednej probówki do następnej. Następnie po kilku minutach inkubowania roztworu dodałam do każdej probówki 2 ml skrobi i pozostawiłam w temperaturze 37oC na pół godziny.
Stężenia amylazy w kolejnych probówkach i ich zabarwienie po dodaniu jodu w jodku potasu:
Lp.
% zawartości amylazy
Zabarwienie po dodaniu skrobi
1
20
Bezbarwne
2
10
3
5
4
2,5
Lekko żółte
1,25
Fioletowe
6
0,625
Granatowe
7
0,313
8
0,156
9
0,078
0,039
Aby obliczyć ilość 0,1%-owego roztworu skrobi rozłożonego w czasie 30 min przez 1 ml śliny ułożyłam proporcje:
2ml- 0,625 %
xml-100%
Po wymnożeniu „na krzyż” otrzymałam wartość 320 ml, jest to objętość amylazy, którą może rozłożyć 1ml śliny.
pu_lina